培养细胞的细胞生物学基本概念

这篇文章给大家聊聊关于在细胞培养的过程中避免污染的关键环节有哪些,以及细胞污染解决办法有什么对应的知识点,希望对各位有所帮助,不要忘了收藏本站哦。

本文目录

  1. 在细胞培养的过程中避免污染的关键环节有哪些
  2. 养细胞有哪些经验和教训
  3. 动物细胞培养中如何保证在传代过程中不被微生物污染
  4. 细胞在培养箱中生长几天未处理就污染是什么原因

在细胞培养的过程中避免污染的关键环节有哪些

细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物,而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质,包括生物和化学物质。

培养细胞受细菌污染后,会出现培养液变混浊,pH改变。也有的培养液肉眼观察无多少改变,只能在镜下发现菌体才知污染。所以,每天应仔细观察。污染后细胞发生病理改变,胞内颗粒增多、增粗,最后变圆脱落死亡,造成试验失败和细胞株(系)丢失。

培养细胞受真菌污染后,可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点,有的散在生长,培养液一般不发生混浊;倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中,有的呈链状排列。念珠菌和酵母菌呈卵圆形散在细胞周边和细胞之间。个体细小,有增多趋势。镜下看时,要将培养瓶用酒精棉球擦干净,以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。真菌污染后,细胞生长变慢,但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。

支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物,最小直径0.2μm,一般过滤除菌无法去除它,光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发现,能在偏碱条件(pH7.6~8.0)下生存,对青霉素有抗药性,多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。电镜下可见其有三层结构,无细胞壁,中央有电子密度大的密集颗粒或丝状的中心囊。

培养细胞受支原体污染后,部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢,部分细胞变圆,从瓶壁脱落。但多数细胞污染后无明显变化,或略有变化,若不及时处理,还会产生交叉污染。

采用组织细胞培养法生产疫苗,如果没有除去潜在病毒的组织培养物,会产生病毒污染。目前,从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。尽管病毒污染的细胞不影响原代培养,但生产疫苗是不安全的。若二倍体细胞系有SV40或多发瘤病毒,B淋巴细胞含EB病毒,细胞和会发生变异、转化,形成异倍体的细胞系。因此,潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。五、非同种细胞污染

由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开,操作不当,往往会使一种细胞被另一种细胞污染。如“灵长类”细胞系发现猴和鼠类细胞的混合物,ERK/KD细胞是从兔肾中分离出来的,而现在却认为是HeLa细胞。目前,世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染,致使许多实验宣告无效。非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生,大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致。第二节污染来源及鉴别一、污染来源

细胞培养过程中污染的来源主要有以下几条途径。1、不洁的动物组织标本

很多动物组织本该是无菌的(直接与外界相通的呼吸道和消化道、泌尿系统除外),但由于取材时不小心也会有污染的机会。组织本身含有细菌,如取材时不用浓的抗生素洗液洗涤浸泡,也会带菌,造成细胞污染。2、空气

空气中含有大量的微生物,如果操作室与外界隔离不严或消毒不充分下,很容易造成污染。另外,净化工作台使用过久,滤板未定期更换或长久不更换,滤气受尘埃堵塞,工作时不带口罩或外界气流过强,污染空气进入操作区,也会导致污染。春夏季南方地区多雨,空气湿度大,含菌量多,工作不注意也易造成污染。

3、清洗消毒

培养用物品、材料洗刷不净,培养用液和器材灭菌不彻底也会引入微生物和有毒物质。4、操作

来自操作者的污染主要有以下几方面:

器材和溶液使用前未仔细检查是否污染过,或者是否已经消毒灭菌处理过,或者虽经处理,时隔已久又末重新处理。

操作者未戴口罩、帽子,呼出气中排出细菌和支原体。

养细胞有哪些经验和教训

①首先一定注意不要污染!!!污染很麻烦,整个细胞房翻来覆去搞不定。进细胞房之前各种清洁消毒工作一定不要嫌麻烦。进行实验前,不论是细胞房还是超净台务必保证紫外灯30分钟照射。

②培养前准备工作一定要十分充分,包括耗材无菌处理,储备量,试剂储备等。有条件的甚至可以弄清楚近期水电情况以及备用水电,防止突然断水断电。

③养细胞之前对所养细胞要有了解。不同细胞应区别对待,分开操作,使用不同的培养基和血清。并且细胞所用培养箱最好不培养其他(如细菌)等。

④细胞要分批传代,不会因为传代失败导致全部丢失。

⑤最重要的一点,细胞也是生命,并且十分脆弱,要慎重对待!不能因为后期熟悉了而忽略培养细胞中的细小繁琐步骤。

动物细胞培养中如何保证在传代过程中不被微生物污染

首先,洁净环境要达标.洁净间与超净台在使用之前都要经过至少半小时紫外灯照射灭菌.

其次,传代所用培养基要按使用说明进行灭菌处理.

最后,接种时要将手彻底消毒,或者戴灭菌手套操作,接种过程要在酒精灯旁操作.使用接种环、接种针前及使用过程中要将环或者针用酒精灯烧至发红,彻底灭菌.传代完成后要密封好再传出培养.

细胞在培养箱中生长几天未处理就污染是什么原因

甲醛加高锰酸钾,过夜即可。

可以先用0.3%消毒液灭擦一遍,再用酒精擦一遍,最后你找个紫外灯架装上紫外灯,当然用酒精擦一下,然后放进培养箱,照它个几个小时,后拿出来就行了!过夜后调整好温度和二氧化碳后就可以放细胞了!

关于在细胞培养的过程中避免污染的关键环节有哪些,细胞污染解决办法有什么的介绍到此结束,希望对大家有所帮助。

8.下列各项不属于原核生物的一组是 A